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本文从以下几个角度介绍。

BamHI（1)研究人员将TFEB第114位的丝氨酸sal启动子换成丙氨酸，该过程需在DNA分子水FFpGEX-6p-1而不是蛋白质水上操作，原因是氨苄青霉RnR素抗性①基因（2）为获得目的基因，根据重叠延伸PCR5重组质粒引物设计原理，共设计四条引物，引物目的基因片段的序列如表所示，引物F和R的5'端分别添加了BamHI和SalI的识别序列。引物引物序列(5'→3')FCGCGGATCCATGGCGTCACGCATAGGGTTGCFnAGCCCAGCCCAGGGC GCTCCGAAACCCCCACRnGTGGGGGTTTCGGAG CGCCCTGGGCTGGGCTRACGCG↓TCGACTCACAGCACATCGCCCTCCTC注：下划线为突变基因位点；加粗字母为限制酶的识别序列；箭头指向限制酶的切割位点。过程①中使用的引物是。将过程①和②获得的产物回收、纯化后混合，热变性后，得到含有突变碱降温，目的是获得含（填图中数字）的杂交链，然后进行基对且双链等长的目的基因。(3）过程④进行的操作是。图中目的基因两端的黏性末端的序列分别为（按5'→3'的顺序填写）。过程5需要的工具是（填抗生素）（4）研究人员将重组质粒导人大肠杆菌，转化后的大肠杆菌需接种在含有的培养基上。培养基上长出的菌落需要进一步筛选，请写出一条筛选的思路：15.（17分)癌症是人类健康的重大威胁之一，传统治疗手段难以实现精准治疗。超声波具有非侵入、组织穿透性强、时空特异性等特点，科研人员拟开发“响应超声波的药物递送系统”细菌以实现癌症的精准治疗。(1)用于培养药物递送细菌的液体培养基中包含水、酵母提取物、蛋白陈等成分，其中蛋白陈主和维生素。可利用的方法快速直观地测定细菌数量，以便要为细菌提供即时使用适量的细菌进行治疗。（2)C蛋白有抗肿瘤作用，超声波可导致局部温度升高到42°℃。科研人员制备了工程菌1，其中含有图1所示的基因表达载体，图1中的“TT"表示“T蛋白二聚体”。37°℃培养的工程，从而发挥抗肿瘤作用。菌1接受超声波刺激后，可升温至42℃，10 000f --T1-0-T2 -△-T342 ℃TT37°℃达强100白表P1启动子C基因HP2启动子T基因10FC蛋终止子终止子373839404142温度/℃注：P2为持续表达启动子；一—代表抑制。图1图2答案解析网(3)T蛋白有T1、T2和 T3三种亚型，具有相似的功能，制备分别含有这三种基因的工程菌1，（填“T1”“T2”或并检测C蛋白表达量，结果如图2所示。科研人员最终选择“T3"）基因进行后续研究，判断的依据是（4）工程菌1只能在超声波刺激期间发挥作用，科研人员设计了含图3所示的基因表达载体的工程菌2，可以实现在短时间的超声波刺激后维持长时间的治疗。已知B基因编码的B酶可以作用于识别位点a和b，使a、b处的DNA发生断裂，最终导致a、b之间的DNA片段发生倒转。请根据以上信息，使用下列选项将表达载体补充完整。；（填序号）.答案解析网；P2启动子终止子终止子终止子ab注：箭头表示启动子启动转录的方向。图3答案解析网①P1启动子；②P3启动子（持续表达型启动子）；③T基因；④C基因；5B基因名师卷生物测试（十二）第4页（共4页）

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