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·生物学·参考答案及解析养基，即培养基中的碳源为纤维素：培养基甲是以纤维细胞，PS细胞与小鼠内细胞团一样，具有全能性，所以素作为唯一碳源的选择培养基，将瘤胃液先接种到培该过程结束后，细胞的全能性增大，结合慰图，重构胚养基中进行培养，其目的是筛选出纤维素分解菌并富在加入Kdm4d的mRNA和TSA后，发育成克隆鼠集培养；灭菌是指用强烈的理化因素杀死物体内外所而Kdm4d的mRNA表达产物为组蛋白去甲基化稿，有的微生物（包括芽孢和孢子），常用的方法有灼烧灭可以使组蛋白去甲基化，TSA为组蛋白脱乙酰化酶抑菌、干热灭菌、湿热灭菌，装有培养基的锥形瓶常用的制剂，抑制组蛋白脱乙酰化酶的作用，保持组蛋白乙酰灭菌方法是湿热灭菌。化，即组蛋白乙酰化和去甲基化有利于重构胚后续的(2)甲培养基是液体培养基·乙培养基是周体培养基，胚胎发有过程所以与甲培养基相比，乙培养基在化学成分上增加了(4)克隆鼠Y是用图1巾黑鼠的成纤维细胞和灰鼠的琼脂。在锥形瓶、试管和培养基表面均加入子层无菌卵母细胞通过核移植技震翡到的，不考虑环境因素的的石蜡，其作用是密封创设无氧环境，右利子蜜胃中的影响，克隆鼠X和克隆鼠Y的性状不是完全相同的，(厌氧)纤雏素分解菌的生长、繁殖因为克隆鼠X的基因来自黑鼠，克隆氧Y的基因来自(3)在5个微生物培养基板且，均接种稀释倍数为黑鼠和灰鼠10的胃部样液YmL,培养4匮时间后，板上长出25，(12分，除标注外，每空1分)的细菌菌落数分别为19g27,190.185、312,计数时应(I)酵母菌ApaL I DNA连接选择菌落数在300丽之间的板，故去掉27和312(2》①标记基困不需西两个数值每危升样品中含有细菌数量为(192十190十②转化扰原一抗体杂交185)÷3÷1×10=6.3×10个/mL,算出YmL为③、一？分)琼脂糖凝胶电泳(2分)0.3mL【解析1(1)由于载体上的启动子往往具有物种特异性，(4)分析题表可知，在相同条件下，菌株C纤雏素降解PSSOD基因上游的启动子应选择酵母菌的启动子：图1率最高，秸秆失重最多，秸秆残重最少，说明纤维素被1所示的表达载体存在氨苄青霉素抗性基因，不能导入用分解的最多，即菌株C分解菌纤维素酶的活力最高于食品生产的酵母菌中，因此可以利用ApaL.I切除该24.(10分，每空1分)抗性基因的部分片段使其失效，再用DNA连接酶使表(1)原代培养接触抑制胰蛋白群达载体重新连接起来。(2)睢性或维性(2)①作为受体细胞的酵母菌缺失ThyA基因，必须在(3)MⅡ（或减数分恕Ⅱ中）增大不具有去甲基含有胸腺密啶的培养蒸中才能存活，因此图示表达载化乙酰化体上的ThyA基圆可作为标记基因，供鉴定和选择：由(4)不是于导入的表达载体的酵母菌中含有TyA基因，面普【解析】(1)从黑鼠体内获得体细胞后，获得单细胞悬通酵母能邓有ThyA基因，因此为了筛选出成功导液·之后对其进行的初次培养称为原代培养：培养的细入表达载棒的酵母菌，所使用的培养基不需要添加胸胞在贴壁生长至充满培养皿底时停止分裂，该现象为腺密啶。接触抑制：接触抑制是大多数动物细胞培养过程巾表②目的基因进人受体细胞内，并且在受体细胞内维持现出的正常现象，实验室中常用胰蛋白酶处理破坏细稳定和表达的过程，称为转化：从受体细胞中检测到胞间的联系，从培养肌底分离下来，再分瓶继续传代PSSOD基因转录了mRNA.还需进行抗原一抗体培养】杂交，以检测PSSOD基因是否翻译出相应的蛋白质.《2)图1技术流程中选用的灰鼠和代孕白鼠都是睢鼠，③由于引物的作用是在DNA聚合酶的催化下，在引物提供多能干细胞的黑鼠，性别可以是雄性，也可以是的3端连接上脱氧核苷酸，因此设计的扩增引物位置雎性是图2中的bc。一个内含目的基因的模板DNA经(3)在核移桩操作之前应先将卵母细胞培养至MⅡ期PCR扩增4次共产生2'一2×4=8个等长的DNA片(或诚数分裂Ⅱ巾期)，小鼠成纤维细胞是高度分化的段：PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。

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