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情的亲本，进行杂交实验：验证该比例是由于外显率降低导致的。不考虑其他变异和致死实验步骤：从后代中选择自由交配。实验结果：若后代中表型及比例为,则为外显率降低导致的。野3.(14分)α-环糊精是食品、医药等常用原料。a不糊精葡萄糖糖基转移酶（©gt)生产a、B和y努第8位天冬氨酸和第位酯氨酸是酶与底物作用的关健位点江南大学一实验室将环糊精的混合物，分离纯化十分不便。cgt在芽孢杆菌中的产量铰低，诱变效果不佳。©的分别替换为赖氨酸和精氨酸后，形成的重组©gt催化特异性提高了2？倍。请回客行易◇问题。通用引物FP1突变引物FP2突变引物RP1崩用引物RP2PCR第1对引物的PCR产物第2对引物重叠区域些的PCR产物↓混合、变性、退火5354-5烧5不能延伸通用引物FP1延伸◇PCR通用引物RP2突变的基因重叠PCR是常用的DNA定点突变技☑(1)蛋白质工程的第一步通常是。术，其原理如图所示。与细胞内的DNA复制相比，PCR不需要用到酶。要完种引物。(2)下图是该聽编码链的部分序列，请你设计替换第372位天冬氨酸（密码子：GAU、GAC)成两处位点的突变，至少要设计游到赖氨酸（密码子：AAA)的引物FP2和RP1中三个连续碱基，分别为5-TAGACCGGC GATGGCGACCCCAAC AACCGG-3375370FP2:5-TAGACCGGCGATGGCCCCAACAACCGG-3'RP1:5-CCGGTTGTTGGGGCCATCGCCGGTCTA-3◇(3)用大肠杆菌大量生产重组cgt需要解决酶的分泌问题。重组©gt位于双突变载体（简称T载体)上，研究人员将重组cgt基因与pET-20b(十)载体（简称p载体）上的pelB信号肽序列连接，构成重组载体cgtp,该过程如图所示。应选用对T载体酶切处烟对P载体进行酶切处理，并用酶构建重组载体cgtp,导人目的理，用工程菌。培养基中除基本营养外，还需加入完成筛选。Bcl I Sma I BamH ITAaI当Xma I BeiITAa I BamH I重组cg」pelBT7启动子咽PMD18-T/cg(2pET-20b(+)双突变载体oriori3.72kb◇氨苄青等素抗性基因氨苄青霉素抗性基因重组cgpelBT7启动子①EcoR I5'GAATTC-3'④XmaI5'CCCGGG--3'重组载体cgt-p②BamH I 5',GGATCC-3'⑤SmaI5 CCCGGG--35.77kb③BClI5'-TGATCA--3'⑥agI5'-TCCA-3蝶氨苄青霉素抗性基因生物第8页（共8页）

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